پاورپوینت الكتروفورز (pptx) 24 اسلاید
دسته بندی : پاورپوینت
نوع فایل : PowerPoint (.pptx) ( قابل ویرایش و آماده پرینت )
تعداد اسلاید: 24 اسلاید
قسمتی از متن PowerPoint (.pptx) :
به نام خدا
به معني حمل كردن گرفته شدهphoresis به معني الكتريسيته وكلمه الماني electroeusواژه الکتروفورز از کلمه لاتين
الكتروفورز
الكتروفورز براي جدا سازي ماكرومولكول ها بر پايه فرايند فيزيكي وحداقل تغيير در ساختار مولكول
وپروتئينDNAحركت يك مولكول باردار در يك ميدان الكتريكي تحت تاثير يكسري از مشخصات مولكول از جمله اندازه مولكول، شكل مولكول، شارژ (باردار بودن مولكول)، نوع مولكول و شرايط محيط اطراف
Support medium تفاوت اصلي در الكتروفورزها بستگي به بستر حركت
الكتروفورز در محيط مايع يا نيمه جامد
الكتروفورز در محيط مايع عملا با دو مشكل عمده
گرماي حاصل از جريان الكتريكي به همرفت و در نتيجه بي نظمي باندهاي پروتئيني تفكيك شده
انتشار تدريجي مولكول‌ها سبب پهن شدن محدوده‌ي اجزاي جدا شده مي‌گردد
الكتروفورز در محيط‌هاي نيمه جامد اين مشكلات را به حداقل مي‌رساند
انواع متداول الكتروفورز
۱)الکتروفورز سطحی
۲)الکتروفورز ژل
۳)الکتروفورز در میدان الکتریکی ضربان دار
یک نوار کاغذی یا استات سلولزی بعنوان فاز ثابت
یک محیط نیمه جامد (ژل ) بعنوان فاز ثابت
هر چه غلظت ژل کمتر باشد با آن می توان مولکولهای بزرگتری را بوسیلة الکتروفورز تفکیک
محدودیت
رقیقترین ژلهای آگاروز
ژل پلی اکریل آمید
)PAGE (
الکتروفورز ژل آگارز
نميتوان بزرگتر از 100 جفت باز شناسايي كرد
انواع متداول الكتروفورز
۱)الکتروفورز سطحی : استفاده از نوارهاي كاغذي و استات سلولز
اندازه مولكول نقشي ندارد بلكه جداسازي براساس بارالكتريكي
جداسازي پروتئين ها كارآمد بوده اما در مورد اسيدهاي نوكلئيك كاربرد چنداني ندارند
بستره كاغذي و استات سلولز تا حدودي ناهمگن بوده و بنابراين در ميزان تفكيك اختلال
انواع متداول الكتروفورز
۲)الکتروفورز ژل
به دو نوع الکتروفورز ژل پلی اکریل آمیدو الکتروفورز ژل آگارز
الکتروفورز ژل پلی اکریل آمید
دارای قدرت تفکیک بسیار بالائی بوده و برای تفکیک پروتئین ها و اسید های نوکلئیک
هر چه غلظت پلی اکریل آمید بیشتر باشد قدرت تفکیک ژل بیشتر خواهد بود و مولکول های دارای وزن
مولکولی نزدیک به هم را بهتر تفکیک
منافذ ژل‌پلي اكريل‌آميد معمولا كوچك‌تر از منافذ آگارز
PAGE
پلي‌اكريل‌آميد براي الكتروفورز اغلب پروتئين‌ها( تا وزن صدها كيلو دالتون) و پلي‌نوكلئوتيدهاي با طول 5 تا 2000 زوج مناسب‌تر
آگارز براي الكتروفورز پروتئين‌هاي بسيار بزرگ و پلي‌نوكلئوتيدهاي 50 تا 3000 زوج باز
انواع متداول الكتروفورز
بررسي پروتئين ها با استفاده از
پس از ایجاد میدان الکتریکی، پروتئین‌ها به حرکت
PAGE
بار مؤثر در ایجاد حرکت بار خود پروتئین نیست
بار ماده اي به نام
SDS
مولكول بزرگ بار منفي
از میان حفره های شبکه‌ی پلی اکریل آمید عبور کرده
مولکولهای کوچک‌تر سریع‌تر از مولکولهای بزرگ حرکت
درصد بیشتری از منافذ، مولکولهای کوچک را از خود عبور
باعث واسرشت شدن پروتئین‌ها شده و به آنها متصل می‌‌شود
SDS
به صورت تک رشته‌ای؛ از مواد واسرشت کننده نظیر اوره یا فرمالدئید در ژل، هم‌زمان با الکتروفورز
DNA
تفكيك
PAGEژل پلي آکريل آميد
روش PAGE برای بررسی جهش‌ها و تعیین توالی DNA استفاده می‌‌شود.
محاسن ژل پلي آکريل آميد:
۱-قدرت تفکیک بالا
2-بستر آکریل آمید حداقل اصطکاک با مولکولی که در این بستر حرکت
3- برخلاف ژل‌هایی مثل ژلهای نشاسته، ژل اکریل آمید تردو شکننده نیست.
4- ژل اکریل آمید شفاف بوده و نگه‌داری آن آسان
5- چون به صورت شیمیایی تهیه می شود، می تواند به صورت بسیار خالص تولید
نشاسته از ديگر محيط‌هاي الكتروفورز است كه در موارد خاصي مورد استفاده قرار مي‌گيرد. اين محيط در جداسازي ايزوآنزيم‌ها معمولا مناسب‌تر از ساير محيط‌هاي الكتروفورز است
PAGEژل پلي‌اكريل‌آميد
معايب ژل پلي‌اكريل‌آميد:
1- وقت‌گير بودن تهيهي
2- سمي بودن و حتما بايستي از دستكش‌هاي لاستيكي استفاده شود.
3-. نمی توان آنها را مثل ژلهای نشاسته، به چندین لایه برش داد، پس با این ژل امکان مطالعه‌ی هم‌زمان چند سیستم وجود ندارد.
4. روشی بسیار گران است، 3 تا 5 برابر گران‌تر از دستگاه الکتروفورز با ژل نشاسته می باشد.